1.本发明涉及植物组织培养技术领域，种景植物组织具体地说，天科通用涉及一种景天科多肉植物通用的多肉的开开放式组织培养方法。
背景技术：
2.多肉植物(succulentplant)，放式方法是培养指植物器官的茎、或叶、种景植物组织或根具有发达的天科通用薄壁组织用以贮藏水分，在外形上显得肥厚多汁的多肉的开一类植物。多肉植物家族十分庞大，放式方法现今已知的培养多肉植物达一万余种，在分类上隶属100余科。种景植物组织随着杂交选育和人工诱变的天科通用不断开展，多肉植物的多肉的开分类越来越细，新种还在不断增加。放式方法多肉植物多生长于干旱、培养干燥地区，抗逆性强，是荒漠改造的优良先锋物种，且具有药用、食用和观赏价值。我国关于多肉植物的研究开始较晚，多肉植物的报道与文献也少于研究开始较早的日、韩等国。据报道，近年来我国多肉植物的生产量达5000万盆以上，且数量和价格呈逐年增加的趋势，国内开始大量从国外引种多肉植物，市场规模逐渐扩大，出现了多肉植物生产和销售热潮。
3.常见栽培的多肉植物包括景天科、大戟科、番杏科、仙人掌科、百合科、龙舌兰科、萝摩科等。其中景天科多肉植物外观小巧玲珑，植株肥厚多汁，造型特异，仪态万千，深受消费者的喜爱。景天科繁殖中效率较高的规模化繁育技术有叶插法、分株法、组织培养等。叶插法和分株法繁殖系数较低、增殖速度较慢，导致需求量增加与其繁殖量小的矛盾日益凸显；组织培养的快速繁殖技术虽然更适应于工厂化繁育，但因景天科品种株型各异，导致每个品种一种组培方案的局面，而且植物组织培养技术对无菌环境要求较为严格，造成组培生产投入过高、操作程序繁杂、污染严重等问题，制约了该技术的应用和普及。
4.开放式组织培养的器械、培养基等无需高温高压灭菌，整个接种操作无需在超净工作台进行，可以简化操作程序，节约时间和生产成本，在少部分多肉中已开展了开放式组织培养。但抑菌剂成为开放式组织培养成功的关键，抑菌剂在一定程度上会抑制细菌的生长，降低污染率，但因抑菌剂的加入，无菌苗的生长也在一定程度上受到了影响。另外，大都使用农药类、抗生素类、消毒剂类、植物提取物等作为抑菌剂，但农药类抑菌剂对环境有一定的污染，抗生素类易使微生物产生抗药性，消毒剂类保存不易，植物提取物的提取较为繁琐等，新型抗菌物质尚未有相关的应用研究报道。
技术实现要素：
5.针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种景天科多肉植物通用的开放式组织培养方法。即通过添加一种新型组织培养抑制剂——植物净ⅰ型和植物净ⅱ型(本品长效、广谱、高活性，不杀菌，却能抑制、干扰菌落在培养基上萌发成菌丝，也可分离微生物关键蛋白质抑制菌丝复制)，采用开放式组织培养方法，研究筛选出的5种景天科多肉通用的外植体消毒法、叶片增殖分化出芽和芽生根的方案。此外，本发明选择的5种景天科多肉植物多样化，涉及了景天科中的4个属、景天属中的两种颜色种、颜色变化和不变种、原种和杂交种以及草本和亚灌木(
①
红宝石为景天科和拟石莲花属杂交的草本多肉植物，秋冬季
节变红或者夏天变绿；
②
桃之卵为景天科风车草属草本，颜色粉嫩；
③
虹之玉为景天科景天属草本多肉植物，红色或粉红色；
④
赤鬼城为景天科青锁龙属亚灌木多肉植物，新叶绿色，老叶褐色；
⑤
天使之泪为景天科景天属草本植物，淡绿色的叶子基本不会怎么变色)，使得本发明的方法通用性更加全面。
6.本发明提供如下技术方案：
7.一种景天科多肉植物通用的开放式组织培养方法，具体步骤如下：
8.1)选择5种景天科多肉植物，包括：红宝石、赤鬼城、虹之玉、桃之卵和天使之泪；
9.2)外植体消毒：选择叶片作为外植体，对其进行消毒处理；所述的消毒方法为先用75％乙醇浸泡30秒，再使用2％次氯酸钠浸泡10分钟，然后使用无菌蒸馏水冲洗3-5次；
10.3)叶片的增殖分化出芽培养：将步骤2)中经过消毒处理的叶片接入诱导增殖分化出芽的培养基中，常规培养至分化出芽；所述的增殖培养基为包含3mg/l6-ba、0.8mg/lnaa、2ml/l植培净ⅱ型的ms培养基；
11.4)芽的生根培养：将步骤3)中形成的芽转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多肉植物组培苗；所述生根诱导的培养基为包含1mg/liba、0.5mg/lnaa、0.1mg/lkt、4ml/l植培净ⅰ型的ms培养基；
12.其中，所述步骤2)中外植体平均消毒率约为85％。
13.其中，所述步骤3)中叶片增殖分化培养50天平均出芽约15个。
14.其中，所述步骤4)中芽生根培养50天的平均生根率约为70％。
15.其中，所述步骤3)、4)中的培养基含20g/l蔗糖、5g/l琼脂粉，ph值为5.8。
16.其中，所述步骤3)、4)中常规培养的培养条件为光照强度2000lx、光照时间14h/d，恒温培养温度为26
±
1℃。
17.其中，所述步骤2)、3)、4)中的培养基无需高温高压灭菌，操作步骤可脱离严格无菌的操作环境。
18.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
19.1)本发明的方法从外植体消毒，叶片增殖分化出芽、芽生根到获得组培苗的培养时间约为100天，增殖出芽个数平均约15个、平均生根率约70％，相比传统叶插法和分株法等，可同时、快速的为多种景天科多肉植物的应用提供大量优良的原材料。
20.2)本发明的开放式组织培养方法相比传统组织培养，无需高温高压灭菌，操作步骤可脱离严格无菌的操作环境，大大节约成本和时间，对多肉植物的工厂化育苗、新品种的培育等方面具有重要意义。
21.3)本发明的方法使用的新型组织培养抑制剂在不影响植株正常生长的同时能够有效抑制菌落的生长，相比传统使用农药类、抗生素类、消毒剂类、植物提取物等作为抑菌剂，大大减少了对环境的污染。
附图说明
22.图1：是本发明实施例中使用的5种景天科多肉植物；
23.图2：是本发明实施例中叶片增殖分化出芽情况；
24.图3：是本发明实施例中芽生根情况。
具体实施方式
25.为了更清楚地表达本发明，下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
26.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
27.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
28.下述实施例中所使用的培养基配方与已报道的关于景天科多肉组织培养所使用的培养基不同。
29.实施例1
30.一种景天科多肉植物通用的开放式组织培养方法，包括如下步骤：
31.1)选择5种景天科多肉植物，包括：红宝石、赤鬼城、虹之玉、桃之卵和天使之泪；
32.2)外植体消毒：选择叶片作为外植体，对其进行消毒处理；所述的消毒方法为先用75％乙醇浸泡30秒，再使用2％次氯酸钠浸泡10分钟，然后使用无菌蒸馏水冲洗3-5次；
33.3)叶片的增殖分化出芽培养：将步骤2)中经过消毒处理的叶片接入诱导增殖分化出芽的培养基中，常规培养至分化出芽；所述的增殖培养基为包含3mg/l6-ba、0.8mg/lnaa、2ml/l植培净ⅱ型的ms培养基；
34.4)芽的生根培养：将步骤3)中形成的芽转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多肉植物组培苗；所述生根诱导的培养基为包含1mg/liba、0.5mg/lnaa、0.1mg/lkt、4ml/l植培净ⅰ型的ms培养基；
35.其中，所述步骤2)中外植体平均消毒率约为85％。
36.其中，所述步骤3)中叶片增殖分化培养50天平均出芽约15个。
37.其中，所述步骤4)中芽生根培养50天的平均生根率约为70％。
38.其中，所述步骤3)、4)中的培养基含20g/l蔗糖、5g/l琼脂粉，ph值为5.8。
39.其中，所述步骤3)、4)中常规培养的培养条件为光照强度2000lx、光照时间14h/d，恒温培养温度为26
±
1℃。
40.其中，所述步骤2)、3)、4)中的培养基无需高温高压灭菌，操作步骤可脱离严格无菌的操作环境。
41.本发明的方法从外植体消毒，叶片增殖分化出芽、芽生根到获得组培苗的培养时间约为100天，增殖出芽个数平均约15个、平均生根率约70％，相比传统叶插法和分株法等，可同时、快速的为多种景天科多肉植物的应用提供大量优良的原材料；本发明的方法无需高温高压灭菌，操作步骤可脱离严格无菌的操作环境，大大节约成本和时间，对多肉植物的工厂化育苗、新品种的培育等方面具有重要意义；本发明的方法使用的新型组织培养抑制剂在不影响植株正常生长的同时能够有效抑制菌落的生长，相比传统使用农药类、抗生素类、消毒剂类、植物提取物等作为抑菌剂，大大减少了对环境的污染，市场应用前景广阔。
42.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。